答：Klentaq 是 Taq 的截短版本，缺少酶的 5'>3'-外切核酸酶結(jié)構(gòu)域。Klentaq 提高了保真度，并且比 Taq 更耐熱、更堅(jiān)固。Omni Klentaq 與 Klentaq 的保真度沒(méi)有受到影響。Cesium Klentaq 的保真度略高于 Klentaq。其余突變酶的保真度尚未*確定。

與*級(jí)商業(yè) Taq 相比，我們的突變酶的敏感性不會(huì)因犧牲其特殊的抑制抗性或冷敏感性特征而受到損害，并且允許從人類 DNA 中檢測(cè)單基因拷貝。對(duì)于高產(chǎn)量擴(kuò)增，Klentaq 酶通常需要比 Taq 更長(zhǎng)的延伸時(shí)間，我們建議每個(gè) 1 kb DNA 靶標(biāo)延伸 3-4 分鐘。

答：“LA”代表“長(zhǎng)而準(zhǔn)確”。LA 酶與校對(duì)器混合，并以更好的保真度執(zhí)行。此外，它們是長(zhǎng) DNA 靶標(biāo)的優(yōu)選酶，它們的表現(xiàn)異常出色。此外，它們通常更穩(wěn)健，因此短目標(biāo)擴(kuò)增也可以從中受益。

*關(guān)于長(zhǎng)靶點(diǎn)的提示：對(duì)于純化的 DNA 模板，考慮酶濃度至少為 0.1 ul/1 kb 靶點(diǎn)/50-100 ul 反應(yīng)體積，并允許每 1 kb 靶點(diǎn)有 3-4 分鐘的延伸時(shí)間。對(duì)于粗制樣品，可能需要更多的酶，具體取決于抑制水平（強(qiáng)烈建議使用酶滴定法）。考慮包括我們的 PEC 增強(qiáng)劑。

答：我們的新型酶是 Taq DNA 聚合酶的突變體，經(jīng)過(guò)特別挑選，因?yàn)樗鼈儗?duì)廣泛使用的強(qiáng)效 PCR 抑制劑具有高度抗性，例如全血、血清、血漿、尿液、腐殖酸、膽汁鹽、植物組織提取物、各種食品相關(guān)抑制劑、GITC、乙醇等。因此，這些酶可以在大多數(shù)商業(yè) Taq 產(chǎn)品無(wú)法執(zhí)行的水平上耐受 PCR 中的此類抑制劑。Taq 突變體的這一*功能允許對(duì)各種臨床、環(huán)境和法醫(yī)原始樣品進(jìn)行直接 PCR，從而跳過(guò) DNA 提取步驟。我們的 PCR 增強(qiáng)劑雞尾酒 (PEC) 專為大多數(shù)抑制性粗制 PCR 樣品配制，可進(jìn)一步提高反應(yīng)對(duì)抑制劑的耐受性。此外，我們的一些 PEC 旨在幫助處理困難的、富含 GC 的目標(biāo)。

答：我們*的突變 Taq 酶選擇，對(duì)各種強(qiáng)效 PCR 抑制劑具有耐受性，連同我們的 PCR 增強(qiáng)劑，可實(shí)現(xiàn)各種直接 PCR 應(yīng)用，在許多情況下跳過(guò) PCR 之前的 DNA 提取。酶/增強(qiáng)劑的選擇取決于抑制物質(zhì)的類型和濃度、qPCR 檢測(cè)的類型、熱啟動(dòng) PCR 依賴性、模板的 GC 含量和其他因素。請(qǐng)參閱表格“哪種酶適合我”和“哪種增強(qiáng)劑適合我”。

答：我們所有的酶都非常適合嵌入染料，例如 SYBR Green。實(shí)際上，它們對(duì) SYBR Green 的抗性比野生型 Taq 高 2-3 倍（這種染料在 1X 以上濃度時(shí)對(duì)普通 Taq 的 PCR 有抑制作用），這使它們?cè)?qPCR 中具有一定的優(yōu)勢(shì)，特別是在一些熒光淬滅的反應(yīng)中.

對(duì)于 TaqMan 檢測(cè)，我們只推薦我們的全長(zhǎng) Taq 突變體（OmniTaq 系列或 CesiumTaq），但不推薦 Klentaq 突變體，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈η懈?TaqMan 探針?biāo)璧?5'>3'- 核酸外切酶活性。

提示：對(duì)于復(fù)雜/抑制性 qPCR 樣品，全長(zhǎng) Taq 和 Klentaq 酶的 1:1 混合物可能比單獨(dú)使用全長(zhǎng)酶效果更好。（Klentaqs 通常更堅(jiān)固，半量的全長(zhǎng) Taq 酶足以用于探針切割）。如果你想試試這個(gè)，兩個(gè)緩沖區(qū)也應(yīng)該以相同的比例混合。

注意：我們的酶的 LA 版本不是適合 TaqMan 檢測(cè)的，因?yàn)樗鼈兙哂行?duì)器活性。

答：我們建議您選擇 Omni Klentaq、Omni Klentaq 2、OmniTaq 或 OmniTaq 3，必要時(shí)與 PEC 結(jié)合使用。我們強(qiáng)烈建議對(duì)此類粗樣品進(jìn)行酶滴定，因?yàn)楦嗟拿赣兄诟嗟难?。?qǐng)記住，血液樣本的最佳酶量可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)純化 DNA 樣本的最佳酶量，過(guò)量的酶可能導(dǎo)致過(guò)度擴(kuò)增。通常推薦使用純化 DNA 的酶量減少 5-10 倍。如果更高量的酶（至少 1 ul/25 ul 反應(yīng)）不能令人滿意，您可以加入 PEC 增強(qiáng)劑以進(jìn)一步增強(qiáng)血液抵抗力。我們不建議您將 PEC 用于您的純化 DNA，除非目標(biāo)是富含 GC 且堅(jiān)韌的。 

您也可以使用我們用這些酶配制的 5X PCR 試劑盒（提供方便，但限制了滴定酶的選擇）。

根據(jù)循環(huán)條件，我們建議您使用針對(duì)目標(biāo)優(yōu)化的 PCR 方案進(jìn)行兩個(gè)更改： A. 在 94-95 度下引入更長(zhǎng)的初始加熱步驟，即 8-10 分鐘。在騎自行車之前，以及 B. 延長(zhǎng)時(shí)間的兩倍或三倍。請(qǐng)注意：如果您使用 PEC 增強(qiáng)劑，請(qǐng)記住它可能會(huì)將您的最佳退火溫度降低幾度。

注意：在為您的應(yīng)用選擇合適的酶后，同樣的注意事項(xiàng)也適用于其他抑制性粗樣品。

答：是的，在協(xié)議中進(jìn)行了一些簡(jiǎn)單的更改。我們的新型酶在 PCR 中可以抵抗高達(dá) 40% 的血液。因此，在血液的 qPCR 中，擴(kuò)增應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題（如果你想在瓊脂糖凝膠中運(yùn)行它們，你應(yīng)該看到預(yù)期的產(chǎn)品）。然而，qPCR 中擴(kuò)增產(chǎn)物的光學(xué)檢測(cè)的并發(fā)癥源于血紅素的熒光猝滅效應(yīng)。如果您使用 SYBR Green，解決此問(wèn)題的方法是簡(jiǎn)單地將輸入染料濃度提高到 20-30 X（對(duì)于 5-10% 的血液），甚至更高，具體取決于血液濃度。這將補(bǔ)償淬滅效應(yīng)，并減少背景。

如果您使用 TaqMan 檢測(cè)，同樣由于血液的淬滅作用，我們建議將熒光探針濃度提高到 400-500 nM，并且不超過(guò) 4-5% 的血液。

注意：如果您擴(kuò)增血清、血漿或其他非淬滅粗樣品，則無(wú)需更改這些方案。

答：有些 DNA 提取試劑盒不能*去除起始材料中的 PCR 抑制劑，例如血液或植物組織成分或腐植酸，甚至?xí)胍恍┮种苿?，例如微量的苯酚、氯仿、硫氰酸胍或乙醇。在仔?xì)滴定酶后，可以通過(guò)使用我們的 Taq 抑制劑抗性突變體來(lái)消除這個(gè)問(wèn)題。（與粗制 PCR 樣品相比，這對(duì)我們的酶來(lái)說(shuō)應(yīng)該是一項(xiàng)相對(duì)“容易”的工作，并且您必須確保您不會(huì)過(guò)量使用酶）。

答：我們的冷敏感酶，例如 Cesium Taq、Cesium Klentaq AC 和 Cesium Klentaq C，在低溫下表現(xiàn)出抑制的活性，而在 65 度以上時(shí)它們變得*活躍，因此在 PCR 中具有內(nèi)在的熱啟動(dòng)性能。與涉及抗 Taq 抗體或酶化學(xué)修飾的熱啟動(dòng) Taq 配方不同，它們不需要對(duì)循環(huán)條件進(jìn)行任何更改。

答：一些 Taq 制造商提供的酶單位濃度是由傳統(tǒng) DNA 聚合酶活性測(cè)定法的略微修改版本確定的，該測(cè)定法是早期為非熱穩(wěn)定性 DNA 聚合酶開(kāi)發(fā)的。該測(cè)定基于相對(duì)簡(jiǎn)單和“容易”的反應(yīng)，僅測(cè)量核苷酸在 72 度下?lián)饺霂锌诘?DNA 中，不考慮 PCR 條件下重要的酶質(zhì)量，例如熱穩(wěn)定性和持續(xù)合成能力。因此，它本身不是 PCR 檢測(cè)，并且不提供實(shí)際的“PCR 單位”。因此，它可能無(wú)法顯示和預(yù)測(cè) PCR 中真正的酶性能。因此，我們與其他制造商一樣，相信為每個(gè)反應(yīng)提供推薦的酶量對(duì)于最終用戶來(lái)說(shuō)更加可靠和實(shí)用。